डच अनुसन्धानकर्ताहरूले CRISPR र bioluminescence को प्रयोगात्मक परीक्षणमा संयोजन गर्छन्संक्रामक रोग

नेदरल्याण्ड्सका अन्वेषकहरूका अनुसार भर्खरै विकसित निशाचर प्रोटीनले भाइरल रोगहरूको निदानलाई छिटो र सरल बनाउन सक्छ।
तिनीहरूको अध्ययन, एसीएस पब्लिकेशन्समा बुधवार प्रकाशित, एक संवेदनशील, एक-चरण विधिलाई द्रुत रूपमा भाइरल न्यूक्लिक एसिडहरू र तिनीहरूको उपस्थिति चम्किलो नीलो वा हरियो प्रोटीनहरू प्रयोग गरेर विश्लेषण गर्न वर्णन गर्दछ।
तिनीहरूको न्यूक्लिक एसिड फिंगरप्रिन्टहरू पत्ता लगाएर रोगजनकहरूको पहिचान नैदानिक ​​निदान, बायोमेडिकल अनुसन्धान, र खाना र वातावरणीय सुरक्षा अनुगमनमा प्रमुख रणनीति हो।व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको मात्रात्मक पोलिमरेज चेन रियाक्सन (PCR) परीक्षणहरू अत्यधिक संवेदनशील हुन्छन्, तर परिष्कृत नमूना तयारी वा परिणामहरूको व्याख्या चाहिन्छ, तिनीहरूलाई केही स्वास्थ्य सेवा सेटिङहरू वा स्रोत-सीमित सेटिङहरूको लागि अव्यावहारिक बनाउँछ।
नेदरल्याण्ड्सको यो समूह छिटो, पोर्टेबल र प्रयोग गर्न सजिलो न्यूक्लिक एसिड डायग्नोस्टिक विधि विकास गर्न विश्वविद्यालय र अस्पतालका वैज्ञानिकहरू बीचको सहकार्यको परिणाम हो जुन विभिन्न सेटिङहरूमा लागू गर्न सकिन्छ।
तिनीहरू फायरफ्लाइ फ्ल्याशहरू, फायरफ्लाइ चमकहरू, र जलीय फाइटोप्लाङ्क्टनका साना ताराहरूबाट प्रेरित थिए, जुन सबै बायोल्युमिनेसेन्स भनिने घटनाद्वारा संचालित थिए।यो ग्लो-इन-द-डार्क प्रभाव लुसिफेरेज प्रोटीन समावेश रासायनिक प्रतिक्रियाको कारण हो।वैज्ञानिकहरूले लुसिफेरेज प्रोटिनहरूलाई सेन्सरहरूमा समावेश गरे जुन तिनीहरूले लक्ष्य फेला पार्दा अवलोकन गर्न सजिलो बनाउन प्रकाश उत्सर्जन गर्छन्।जबकि यसले यी सेन्सरहरूलाई पोइन्ट-अफ-केयर पत्ता लगाउनको लागि आदर्श बनाउँछ, तिनीहरूसँग हाल नैदानिक ​​​​डाइग्नोस्टिक परीक्षणहरूको लागि आवश्यक उच्च संवेदनशीलताको कमी छ।जबकि CRISPR जीन सम्पादन विधिले यो क्षमता प्रदान गर्न सक्छ, यसले जटिल, शोर नमूनाहरूमा उपस्थित हुन सक्ने कमजोर संकेत पत्ता लगाउन धेरै चरणहरू र थप विशेष उपकरणहरू आवश्यक पर्दछ।
अन्वेषकहरूले CRISPR-सम्बन्धित प्रोटिनलाई बायोल्युमिनेसेन्ट सिग्नलसँग जोड्ने तरिका फेला पारेका छन् जुन साधारण डिजिटल क्यामेराबाट पत्ता लगाउन सकिन्छ।विश्लेषणको लागि पर्याप्त आरएनए वा डीएनए नमूना छ भनी सुनिश्चित गर्न, शोधकर्ताहरूले रिकोम्बिनेज पोलिमरेज एम्प्लीफिकेशन (आरपीए) प्रदर्शन गरे, एक साधारण प्रविधि जुन लगभग 100 डिग्री फारेनहाइटको स्थिर तापक्रममा सञ्चालन हुन्छ।तिनीहरूले Luminescent न्यूक्लिक एसिड सेन्सर (LUNAS) नामक नयाँ प्लेटफर्मको विकास गरे, जसमा दुई CRISPR/Cas9 प्रोटीनहरू भाइरल जीनोमको विभिन्न सन्निहित भागहरूका लागि विशिष्ट छन्, प्रत्येकमा माथि जोडिएको अद्वितीय लुसिफेरेज टुक्रासँग।
जब अन्वेषकहरूले जाँच गरिरहेका विशिष्ट भाइरल जीनोम उपस्थित हुन्छन्, दुईवटा CRISPR/Cas9 प्रोटीनहरू लक्षित न्यूक्लिक एसिड अनुक्रममा बाँध्छन्;रासायनिक सब्सट्रेटको उपस्थितिमा अक्षुण्ण लुसिफेरेज प्रोटीन बनाउन र नीलो प्रकाश उत्सर्जन गर्न अनुमति दिँदै तिनीहरू निकटतामा हुन्छन्।।यस प्रक्रियामा उपभोग गरिएको सब्सट्रेटको लागि खाता बनाउन, शोधकर्ताहरूले हरियो बत्ती उत्सर्जित गर्ने नियन्त्रण प्रतिक्रिया प्रयोग गरे।हरियो देखि नीलो रङ परिवर्तन गर्ने ट्यूबले सकारात्मक परिणामलाई संकेत गर्दछ।
अनुसन्धानकर्ताहरूले आरपीए-लुनास परख विकास गरेर आफ्नो प्लेटफर्मको परीक्षण गरे, जसले पत्ता लगाउँछSARS-CoV-2 RNAथकाऊ आरएनए अलगाव बिना, र बाट nasopharyngeal स्वाब नमूनाहरूमा यसको निदान प्रदर्शन प्रदर्शनCOVID-19बिरामीहरू।RPA-LUNAS ले SARS-CoV-2 लाई 20 मिनेट भित्र आरएनए भाइरल लोड 200 प्रति/μL भन्दा कम भएको नमूनाहरूमा सफलतापूर्वक पत्ता लगायो।
अन्वेषकहरू विश्वास गर्छन् कि उनीहरूको परखले अन्य धेरै भाइरसहरू सजिलै र प्रभावकारी रूपमा पत्ता लगाउन सक्छ।"आरपीए-लुनास पोइन्ट-अफ-केयर संक्रामक रोग परीक्षणको लागि आकर्षक छ," उनीहरूले लेखे।